Protocolo unificado de digestión y descalcificación de tres métodos de extracción de ADN de restos humanos
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Tabla 1S. Evaluación de la eficiencia de la digestión
Figura 1S. Amplificación ADN de la línea celular 9947A
Figura 2S. Amplificación del ADN de la línea celular 2800M
Figura 3S. Amplificación de ADN de la muestra de fémur
Tabla 2S. ADN recuperado a partir de dos cantidades de material pulverizado
Tabla 3S. Evaluación de resultados en muestras de los casos del Laboratorio
Figura 4S. Porcentaje de éxito del protocolo unificado

Cómo citar

Sierra, W. U., del Castillo-Sabogal, H., & Espitia-Ortiz, T. (2018). Protocolo unificado de digestión y descalcificación de tres métodos de extracción de ADN de restos humanos. Revista De La Academia Colombiana De Ciencias Exactas, Físicas Y Naturales, 41(161), 447–455. https://doi.org/10.18257/raccefyn.527

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Resumen

La identificación de restos humanos esqueletizados con base en el ADN es un procedimiento muy utilizado en los laboratorios forenses del mundo. Existen al menos tres métodos para la obtención del ADN a partir de este tipo de tejido: mediante solventes orgánicos (fenol-cloroformo), columnas de sílice (QIAquick de QIAgen) y perlas magnéticas recubiertas de polímero (PrepFiler Express™ BTA Forensic DNA Extraction Kit). Cada uno de ellos involucra un procedimiento distinto para la digestión y descalcificación del tejido óseo, así como la aplicación de diferentes principios fisicoquímicos para la purificación y la elución del ADN y el uso de diferentes cantidades iniciales de material pulverizado. Aunque los tres métodos han demostrado ser efectivos dependiendo de la calidad de la muestra, en el Laboratorio de Investigación Genética de Restos Humanos del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses se estandarizó un protocolo unificado para la digestión y descalcificación, independientemente del método de purificación. Con este fin, se evaluaron variables como la cantidad de material pulverizado, el uso y la concentración de detergentes, la concentración de proteinasa K, el uso de dispositivos concentradores y de los reactivos del estuche PrepFiler Express™ BTA Forensic DNA Extraction y EDTA. El efecto de las variables se evaluó en muestras de tejido calcificado provenientes de los casos forenses del Laboratorio y en el ADN de líneas celulares conocidas analizando la cantidad de ADN recuperado y la calidad del perfil genético. El protocolo unificado de digestión y decalcificación permite una digestión completa del material pulverizado y, por ende, una mejor recuperación de ADN, independientemente del método de purificación usado. En las muestras analizadas el método tuvo un porcentaje de éxito cercano a 80 %. © 2017. Acad. Colomb. Cienc. Ex. Fis. Nat.

https://doi.org/10.18257/raccefyn.527
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